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ÎÞÈéÁ´Çò¾ú¼ìÑé±ê×¼²Ù×÷³ÌÐò
2023-2-24 11:52:40 2023Äê¹ú¼ÒʳƷÎÛȾÎïºÍÓк¦ÒòËØ·çÏÕ¼à²â¹¤×÷ÊֲᣨÏÂ¾í£©

1 ·½·¨À´Ô´

GB 4789.11-2014¡¶Ê³Æ·°²È«¹ú¼Ò±ê×¼ ʳƷ΢ÉúÎïѧ¼ìÑé¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾ú¼ìÑé¡·¡¢DB46/T 280-2014¡¶ÂÞ·ÇÓãÁ´Çò¾ú²¡¼ì²â¼¼Êõ¹æ³Ì¡·¼°ÎÄÏ׵ķ½·¨¡£


2 ÊÊÓ÷¶Î§

±¾³ÌÐò¹æ¶¨Á˵­Ë®Óã¼°ÆäÑøÖ³»·¾³ÖÐÎÞÈéÁ´Çò¾ú£¨Streptococcus agalactiaeµÄ¼ìÑé·½·¨¡£


3 ÊõÓïºÍ¶¨Òå

3.1 ¦ÂÐÍÈÜѪ

ÔÚ¾úÂäÖÜΧÐγÉÍêȫ͸Ã÷µÄÈÜѪ»·£¬ºìϸ°ûÍêÈ«Èܽ⡣

3.2 ¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾ú

Äܹ»²úÉú¦ÂÐÍÈÜѪµÄ»¯Å§£¨»òAȺ£©Á´Çò¾ú£¨Streptococcus pyogenes£©ºÍÎÞÈ飨»òBȺ£©Á´Çò¾ú£¨Streptococcus agalactiae£©¡£


4 ÅàÑø»ù

4.1 ¸ÄÁ¼Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀ£¨Modified tryptone soybean broth, mTSB£©£º¼û¸½Â¼AÖÐA.1¡£

4.2 ¸çÂ×±ÈÑÇCNAѪÇíÖ¬(Columbia CNA blood agar)£º¼û¸½Â¼AÖÐA.2¡£

4.3 ¸çÂ×±ÈÑÇѪÇíÖ¬(Columbia blood agar)£º¼û¸½Â¼AÖÐA.3¡£

4.4 ¸ïÀ¼ÊÏȾɫҺ£º¼û¸½Â¼AÖÐA.4¡£

4.5 Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀ£¨Tryptone soybean broth, TSB£©£º¼û¸½Â¼AÖÐA.5¡£

4.6 ²ÝËá¼ØÑª½¬£º¼û¸½Â¼AÖÐA.6¡£

4.7 0.25£¥ÂÈ»¯¸Æ(CaCl2)ÈÜÒº£º¼û¸½Â¼AÖÐA.7¡£

4.8 3£¥¹ýÑõ»¯Çâ(H2O2)ÈÜÒº£º¼û¸½Â¼AÖÐA.8¡£


µÚÒ»·¨ ÎÞÈéÁ´Çò¾ú·ÖÀë¼ø¶¨

±¾·½·¨Ïȼì²âÒÉËÆ¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾ú£¬·ÖÀë³öµÄÒÉËÆ¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾ú¾úÖêÔÙ¸ù¾ÝÉú»¯¼ì²âµÈ½øÒ»²½¼ø¶¨ÊÇ·ñΪÎÞÈéÁ´Çò¾ú¡£

6 ¼ìÑé³ÌÐò

ÎÞÈéÁ´Çò¾ú·ÖÀë¼ø¶¨³ÌÐò¼ûͼ1¡£

ͼ1 ÎÞÈéÁ´Çò¾ú·ÖÀë¼ø¶¨³ÌÐò

ͼ1 ÎÞÈéÁ´Çò¾ú·ÖÀë¼ø¶¨³ÌÐò


7 ²Ù×÷²½Öè

7.1 ÑùÆ·µÄ´¦Àí

ÓãÑùÆ·£ºÓãÂé×íºó£¬½«´ý¼ìÓãÑù·ÅÖÃÓڸɾ»µÄ½âÆÊÅÌÉÏ£¬ÓÃ75%¾Æ¾«ÃÞÇáÇá²ÁÊÃÓãÌå±í½øÐÐÏû¶¾¡£ÓÃÎÞ¾ú¼ôµ¶ºÍÄ÷×ÓÈ¡ÓãµÄ¸Î¡¢Æ¢¡¢Éö»ìºÏΪһ·ÝÑùÆ·£¬±³²¿¼¡ÈâΪÁíÒ»·ÝÑùÆ·£¬°´ÎÞ¾ú²Ù×÷·Ö±ð³ÆÈ¡¼ìÑù25g£¬¼ÓÈëÊ¢ÓÐ225mL mTSBµÄ¾ùÖÊ´üÖУ¬ÓÃÅÄ»÷ʽ¾ùÖÊÆ÷¾ùÖÊ1min¡«2min£»»ò¼ÓÈëÊ¢ÓÐ225mL mTSBµÄ¾ùÖʱ­ÖУ¬ÒÔ8000r/min¡«10000r/min¾ùÖÊ1min¡«2min¡£

Ë®ÌåÑùÆ·£º»ìÔȺóÈ¡500mL£¬ÓÃ0.22¦ÌmÂËĤ¹ýÂË£¬½«ÂËĤ֨ÐüÓÚ20mL mTSB£¬»ìÔÈ¡£

Ë®µ×³Á»ýÎïÑùÆ·£ºÈ¥³ýËùÓбí²ãË®ºó£¬»ìÔÈÈ¡25g£¬¼ÓÈë225mL mTSB£¬»ìÔÈ¡£

7.2 Ôö¾ú¡¢·ÖÀë

½«ÖƱ¸ºÃµÄÑùÆ··ÅÖÃÔÚ36¡æ¡À1¡æÅàÑø18h¡«24h¡£

½«Ôö¾úÒº»®Ïß½ÓÖÖÓÚ¸çÂ×±ÈÑÇCNAѪÇí֬ƽ°å£¬36¡æ¡À1¡æ18h¡«24h£¬¹Û²ì¾úÂäÐÎ̬¡£

¦ÂÈÜѪÐÔÁ´Çò¾úÔÚ¸çÂ×±ÈÑÇCNAѪÇí֬ƽ°åÉϵĵäÐ;úÂäÐÎ̬Ϊֱ¾¶Ô¼2mm¡«3mm£¬»Ò°×É«¡¢±íÃæ¹â»¬Í»Æð¡¢ÓÐÈé¹â¡¢Ô²ÐΡ¢±ßÔµÕûÆë£¬²¢²úÉú¦ÂÈÜѪµÄ¾úÂä¡£×¢Òⲿ·Ö¾úÖêÎÞ¦ÂÈÜѪ»·¡£

7.3 ´¿ÅàÑø

ÌôÈ¡5¸ö£¨ÈçСÓÚ5¸öÔòȫѡ£©¿ÉÒɾúÂä·Ö±ð½ÓÖÖ¸çÂ×±ÈÑÇѪÇí֬ƽ°åºÍTSBÔö¾úÒº£¬36¡æ¡À1¡æÅàÑø18h¡«24h¡£

7.4 ³õ²½¼ø¶¨¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾ú

7.4.1 ¸ïÀ¼ÊÏȾɫ¾µ¼ì

ÌôÈ¡¿ÉÒɾúÂäȾɫ¾µ¼ì¡£¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾úΪ¸ïÀ¼ÊÏȾɫÑôÐÔ£¬ÇòÐλòÂÑÔ²ÐΣ¬³£ÅÅÁгɶÌÁ´×´¡£

7.4.2 ´¥Ã¸ÊÔÑé

ÌôÈ¡¿ÉÒɾúÂäÓڽྻµÄÔØ²£Æ¬ÉÏ£¬µÎ¼ÓÊÊÁ¿3%¹ýÑõ»¯Ç⣨H2O2£©ÈÜÒº£¬Á¢¼´²úÉúÆøÅÝÕßΪÑôÐÔ¡£¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾ú´¥Ã¸ÊÔÑéΪÒõÐÔ¡£

7.4.3 Á´¼¤Ã¸ÊÔÑ飨ѡ×ö£©

ÎüÈ¡²ÝËá¼ØÑª½¬0.2mLÓÚ0.8mLÃð¾úÉúÀíÑÎË®ÖлìÔÈ£¬ÔÙ¼ÓÈë¾­36¡æ¡À1¡æÅàÑø18h¡«24hµÄ¿ÉÒɾúµÄTSBÅàÑøÒº0.5mL¼°0.25%ÂÈ»¯¸Æ£¨CaCl2£©0.25mL£¬Õñµ´Ò¡ÔÈ£¬ÖÃÓÚ36¡æ¡À1¡æË®Ô¡ÖÐ10min£¬Ñª½¬»ìºÏÎï×ÔÐÐÄý¹Ì£¨Äý¹Ì³Ì¶ÈÖÁÊԹܵ¹Öã¬ÄÚÈÝÎï²»Á÷¶¯£©¡£¼ÌÐø36¡æ¡À1¡æÅàÑø24h£¬Äý¹Ì¿éÖØÐÂÍêÈ«ÈܽâΪÑôÐÔ£¬²»ÈܽâΪÒõÐÔ£¬¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾úΪÑôÐÔ¡£

7.5 ¼ø¶¨ÎÞÈéÁ´Çò¾ú

¸ù¾Ý7.4½á¹û·ûºÏ¦ÂÐÍÈÜѪÐÔÁ´Çò¾úÌØÕ÷µÄ¾úÖê¿É²ÉÓÃÏÂÁÐÈÎÒ»ÖÖ·½·¨½øÒ»²½È·¶¨ÊÇ·ñΪÎÞÈéÁ´Çò¾ú¡£

7.5.1 Éú»¯¼ø¶¨

²ÉÓÃÉú»¯¼ø¶¨ÊÔ¼ÁºÐ»òÉú»¯¼ø¶¨¿¨£¬ÈçAPI 20 STREP»òVITEK¼ø¶¨¿¨½øÒ»²½È·¶¨ÊÇ·ñΪÎÞÈéÁ´Çò¾ú¡£

7.5.1.1 ÎÞÈéÁ´Çò¾ú²¿·ÖÉú»¯ÊÔÑ飺´¥Ã¸ÊÔÑéÒõÐÔ£¬·Ö½âº£ÔåÌÇ£¬²»·Ö½âɽÀæ´¼£¬ÂíÄòËáÄÆ¡¢CAMPºÍVPÊÔÑé¾ùΪÑôÐÔ£¬ÆßÒ¶ÜÕºÍ6.5%NaClÊÔÑé¾ùΪÒõÐÔ¡£

7.5.1.2 ÎÞÈéÁ´Çò¾ú´«Í³Éú»¯¼ø±ðÒªµã£º

1£©±¾¾úÌØÕ÷¸ïÀ¼ÑôÐÔÇò¾ú£¬¾úÂä½ÏС£¬¦ÂÈÜѪ»·¡¢´¥Ã¸ÊÔÑéÒõÐÔ£¬CAMPÊÔÑéÑôÐÔ¡£

2£©ÓëÆäËûÈÜѪÁ´Çò¾úµÄ¼ø±ð


¸½Â¼AÅàÑø»ùºÍÊÔ¼Á

A.1 ¸ÄÁ¼Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀÅàÑø»ù(Modified tryptone soybean broth, mTSB)

A.1.1 »ù´¡ÅàÑø»ù(Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀTSB)

A.1.1.1 ³É·Ö

Òȵ°°×ëË
17.0g
´ó¶¹µ°°×ëË
3.0g
ÂÈ»¯ÄÆ
5.0g
Á×Ëá¶þÇâ¼Ø£¨ÎÞË®£©
2.5g
ÆÏÌÑÌÇ
2.5g
ÕôÁóË®
1000.0mL
A.1.1.2 ÖÆ·¨

½«A.1.1.1Öи÷³É·ÖÈÜÓÚÕôÁóË®ÖУ¬¼ÓÈÈÈܽ⣬УÕýpHÖÁ7.3¡À0.2£¬121 ¡æÃð¾ú15min£¬±¸Óá£

A.1.2 ¿¹ÉúËØÈÜÒº

A.1.2.1 ¶àð¤¾úËØÈÜÒº

³ÆÈ¡10mg¶àð¤¾úËØBÓÚ10mLÃð¾úÕôÁóË®ÖУ¬ÕñÒ¡»ìÔÈ,³ä·ÖÈܽâºó¹ýÂ˳ý¾ú¡£

A.1.2.2 ÝÁà¤ÍªËáÄÆÈÜÒº

³ÆÈ¡10 mgÝÁà¤ÍªËáÓÚ10mL 0.05mol/LÇâÑõ»¯ÄÆÈÜÒºÖУ¬ÕñÒ¡»ìÔÈ,³ä·ÖÈܽâºó¹ýÂ˳ý¾ú¡£

A.1.3 ÍêÈ«ÅàÑø»ù

A.1.3.1 ³É·Ö

Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀ(TSB)
1000.0mL
¶àð¤¾úËØÈÜÒº
10.0mL
ÝÁà¤ÍªËáÄÆÈÜÒº
10.0mL
A.1.3.2 ÖÆ·¨

ÎÞ¾úÌõ¼þÏ£¬½«A.1.3.1Öи÷³É·Ö½øÐлìºÏ£¬³ä·Ö»ìÔÈ£¬·Ö×°±¸Óá£

Ïà¹Ø²úÆ·£º

¸ÄÁ¼Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀÅàÑø»ù£¨mTSB£©-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé

¶àÕ³¾úËØB-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé

ÝÁà¤ÍªËá2.25mg-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé


A.2 ¸çÂ×±ÈÑÇCNAѪÇíÖ¬(Columbia CNA blood agar)

A.2.1 ³É·Ö

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12.0g
¶¯Îï×éÖ¯µ°°×Ïû»¯Òº
5.0g
½ÍĸÌáÈ¡Îï
3.0g
Å£ÈâÌáÈ¡Îï
3.0g
ÓñÃ×µí·Û
1.0g
ÂÈ»¯ÄÆ
5.0g
ÇíÖ¬
13.5g
¶àð¤¾úËØ
0.01g
ÝÁà¤Ëá
0.01g
ÕôÁóË®
1000.0mL
A.2.2 ÖÆ·¨

½«A.2.1Öи÷³É·ÖÈÜÓÚÕôÁóË®ÖУ¬¼ÓÈÈÈܽ⣬УÕýpHÖÁ7.3¡À0.2£¬121 ¡æÃð¾ú12min£¬´ýÀäÈ´ÖÁ50¡æ×óÓÒʱ¼Ó50mL£»ÎÞ¾úÍÑÏËάÃàÑòѪ£¬Ò¡ÔÈºóµ¹Æ½°å¡£

Ïà¹Ø²úÆ·£º

¸çÂ×±ÈÑÇCNAѪÇíÖ¬-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé


A.3 ¸çÂ×±ÈÑÇѪÇíÖ¬(Columbia blood agar)

A.3.1 »ù´¡ÅàÑø»ù

A.3.1.1 ³É·Ö

¶¯Îï×é֯ø½âÎï
23.0g
µí·Û
1.0g
ÂÈ»¯ÄÆ
5.0g
ÇíÖ¬
8.0g¡«18.0g
ÕôÁóË®
1000.0mL
A.3.1.2 ÖÆ·¨

½«»ù´¡ÅàÑø»ù³É·ÖÈܽâÓÚÕôÁóË®ÖУ¬¼ÓÈÈ´ÙÆäÈܽ⡣121¡æ¸ßѹÃð¾ú15min¡£

A.3.2 ÎÞ¾úÍÑÏËάÃàÑòѪ

ÎÞ¾ú²Ù×÷Ìõ¼þÏ£¬½«ÃàÑòѪ¼ÓÈ뵽ʢÓÐÃð¾ú²£Á§ÖéµÄÈÝÆ÷ÖУ¬ÕñÒ¡Ô¼10min£¬¾²Öúó³ýÈ¥¸½ÓÐѪÏËάµÄ²£Á§Öé¼´¿É¡£

A.3.3 ÍêÈ«ÅàÑø»ù

A.3.3.1 ×é·Ö

»ù´¡ÅàÑø»ù
1000.0mL
ÎÞ¾úÍÑÏËάÃàÑòѪ
50.0mL
A.3.3.2 ÖÆ·¨

µ±»ù´¡ÅàÑø»ùµÄζÈΪ45¡æ×óÓÒʱ£¬ÎÞ¾ú¼ÓÈëÃàÑòѪ£¬»ìÔÈ¡£Ð£ÕýpHÖÁ7.2¡À0.2¡£Çã×¢15mLÓÚÎÞ¾úƽÃóÖУ¬¾²ÖÃÖÁÅàÑø»ùÄý¹Ì¡£Ê¹ÓÃǰÐèÔ¤ÏȸÉÔïÆ½°å¡£Ô¤ÏÈÖÆ±¸µÄƽ°åδ¸ÉÔïʱÔÚÊÒηÅÖò»µÃ³¬¹ý4h£¬»òÔÚ4¡æÀ䲨²»µÃ³¬¹ý7d¡£

Ïà¹Ø²úÆ·£º

¸çÂ×±ÈÑÇѪÇíÖ¬»ù´¡-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé

ÍÑÏËάÑòѪ-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé


A.4 ¸ïÀ¼ÊÏȾɫҺ

A.4.1 ½á¾§×ÏȾɫҺ»ù´¡ÅàÑø»ù

A.4.1.1 ³É·Ö

½á¾§×Ï
1.0g
95£¥ÒÒ´¼
20.0mL
1£¥²ÝËáï§Ë®ÈÜÒº
80.0mL
A.4.1.2 ÖÆ·¨

½«½á¾§×ÏÍêÈ«ÈܽâÓÚÒÒ´¼ÖУ¬È»ºóÓë²ÝËáï§ÈÜÒº»ìºÏ¡£

A.4.2 ¸ïÀ¼ÊϵâÒº

A.4.2.1 ³É·Ö

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1.0g
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2.0g
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A.4.2.2 ÖÆ·¨

½«µâÓëµâ»¯¼ØÏȽøÐлìºÏ£¬¼ÓÈëÕôÁóË®ÉÙÐí³ä·ÖÕñÒ¡£¬´ýÍêÈ«Èܽâºó£¬ÔÙ¼ÓÕôÁóË®ÖÁ300mL¡£

A.4.3 ɳ»Æ¸´È¾Òº

A.4.3.1 ³É·Ö

ɳ»Æ
0.25g
95£¥ÒÒ´¼
10.0mL
ÕôÁóË®
90.0mL
A.4.3.2 ÖÆ·¨

½«É³»ÆÈܽâÓÚÒÒ´¼ÖУ¬È»ºóÓÃÕôÁóˮϡÊÍ¡£

A.4.4 Ⱦɫ²Ù×÷²½Öè

½«Í¿Æ¬Ôھƾ«µÆ»ðÑæÉϹ̶¨£¬µÎ¼Ó½á¾§×ÏȾɫҺ£¬È¾1min£¬Ë®Ï´£»µÎ¼Ó¸ïÀ¼ÊϵâÒº£¬×÷ÓÃ1min£¬Ë®Ï´£»µÎ¼Ó95£¥ÒÒ´¼ÍÑÉ«£¬Ô¼15s¡«30s£¬Ö±ÖÁȾɫҺ±»Ï´µô£¬²»Òª¹ý·ÖÍÑÉ«£¬Ë®Ï´£»µÎ¼Ó¸´È¾Òº£¬¸´È¾1min£¬Ë®Ï´ºó½øÐиÉÔ¾µ¼ì¡£

Ïà¹Ø²úÆ·£º

¸ïÀ¼ÊÏȾɫҺÊÔ¼ÁºÐ-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé


A.5 Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀTryptone soybean broth, TSB

A.5.1 ³É·Ö

Òȵ°°×ëË
17.0g
ÂÈ»¯ÄÆ
5.0g
´ó¶¹µ°°×ëË
3.0g
Á×Ëá¶þÇâ¼Ø£¨ÎÞË®£©
2.5g
ÆÏÌÑÌÇ
2.5g
ÕôÁóË®
1000.0mL
A.5.2 ÖÆ·¨

½«A.5.1Öи÷³É·ÖÈÜÓÚÕôÁóË®ÖУ¬¼ÓÈÈÈܽ⣬УÕýpHÖÁ7.3¡À0.2£¬121¡æÃð¾ú15min£¬·Ö×°±¸Óá£

Ïà¹Ø²úÆ·£º

Òȵ°°×ëË´ó¶¹ÈâÌÀ£¨TSB£©-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé


A.6 ²ÝËá¼ØÑª½¬

A.6.1 ³É·Ö

²ÝËá¼Ø
0.01g
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5.0mL
A.6.2 ÖÆ·¨

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Ïà¹Ø²úÆ·£º

¶³¸É²ÝËá¼ØÍÃѪ½¬-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé


A.7 0.25£¥ÂÈ»¯¸Æ(CaCl2)ÈÜÒº

A.7.1 ³É·Ö

ÂÈ»¯¸Æ£¨ÎÞË®£©
22.2g
ÕôÁóË®
1000.0mL
A.7.2 ÖÆ·¨

³ÆÈ¡22.2gÂÈ»¯¸Æ£¨ÎÞË®£©ÈÜÓÚÕôÁóË®ÖУ¬·Ö×°±¸Óá£

Ïà¹Ø²úÆ·£º

0.25%ÂÈ»¯¸ÆÈÜÒº-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé


A.8 3£¥¹ýÑõ»¯Çâ(H2O2)ÈÜÒº

A.8.1 ³É·Ö

30£¥¹ýÑõ»¯Çâ(H2O2)ÈÜÒº
100.0mL
ÕôÁóË®
900.0mL
A.8.2 ÖÆ·¨

ÎüÈ¡100mL 30£¥¹ýÑõ»¯Çâ(H2O2)ÈÜÒº£¬ÈÜÓÚÕôÁóË®ÖУ¬»ìÔÈ£¬·Ö×°±¸Óá£

Ïà¹Ø²úÆ·£º

3%¹ýÑõ»¯ÇâøÊÔ¼Á-µã»÷²é¿´²úÆ·ÏêÇé

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